Хламидийная инфекция и методы её диагностики

ХламидияРаспространенность воспалительных заболеваний мочеполовых органов у женщин, вызванных хламидиями, обусловливает актуальность проблемы хламидийной инфекции, особенно в отношении репродуктивного здоровья. По данным исследований последних лет, хламидийную инфекцию обнаруживают у 20-65% женщин детородного возраста с урогенитальными воспалительными заболеваниями инфекционной этиологии.  

В последние десятилетия, благодаря внедрению новых медицинских технологий, достигнуты значительные успехи в изучении биологии хламидий, в частности, сложного цикла их развития, который заключается в существовании двух основных форм микроорганизма — элементарных и ретикулярних телец. Вместе с тем, не выяснены механизмы, которые определяют особенности внутриклеточного паразитирования хламидий .

Согласно существующей номенклатуре, возбудители хламидийной инфекции относятся к семейству Chlamydiacea, рода Chlamydia. Выделены и идентифицированы 4 вида  хламидий: C. trаchomatis, C. pneumoniae, C. psittaci, C.pecorum.  Два первых вида являются возбудителями различных антропонозных, а C. psittaci — зооантропонозных заболеваний. Значение C.pecorum в патологии человека исследуется.

Указанные представители рода Chlamydia имеют один общий родоспецифичний антиген, который выявляют в реакции связывания комплемента (РСК), но отличаются видоспецифическими антителами, которые выявляют в реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Эти антитела продуцируются к основному белку стенки клеток микроорганизма, что позволяет выделять среди каждого вида хламидий большое количество различных сероваров.

В частности, в виде C. trаchomatis существует три группы сероваров — возбудители трахомы А, В, Ва, С; возбудители урогенитального хламидиоза Д, Е, F, G, J, K и возбудители венерической лимфогранулемы — L1, L2, L3, в виде C.pneumoniae описаны штаммы TWAR и JOL207; в виде C. psittaci — 15 сероваров.

В последние десятилетия особое значение в эпидемиологическом аспекте приобрела урогенитальная хламидийная инфекция. Источником инфекции являются пораженные хламидиями половые органы человека, которые являются естественной средой жизни этих патогенных микроорганизмов, которые размножаются в клетках столбчатого эпителия слизистой оболочки этих органов. Источником новых случаев заражения являются больные как с клинически выраженными, так и с бессимптомными вариантами течения хламидийной урогенитальной инфекции.

При этом, по данным некоторых авторов, у 70% женщин с выявленной хламидийной инфекцией клинических симптомов заболевания не было. Существенное значение в распространенности этой инфекции имеют не выявленные, не леченные или неадекватно леченные больные с острым, подострым или скрытым течением урогенитального хламидиоза, в частности, те, которые имеют многочисленные случаи половых отношений.

Распространенности заболевания способствует также высокая частота существования смешанных инфекций мочеполовой системы, что затрудняет диагностику и терапию.

Урогенитальный хламидиоз, как правило, передаётся половым путём. Внеполовой путь передачи (через загрязненные инфицированными выделениями руки, белье, общие полотенца, постель) наблюдают у детей, приводит к возникновению внутрисемейного хламидиоза. В связи с этим, некоторые авторы предложили термин «семейный хламидиоз».

Обоснованием введения этого термина является то, что во время обследования членов семьи возможно выделить хламидийное поражение в двух трёх поколениниях. Это является важным фактором распространения хламидийной инфекции вследствие формирования семейных очагов и создает угрозу заражения, особенно детей. Заражение детей хламидиями может также происходить внутриутробно, во время родов, при прохождении новорожденного через инфицированные родовые пути матери.

Существующие методы диагностики позволяют увеличить возможности обнаружения хламидийной инфекции по различным формам её клинического течения.

Культуральный метод.

Наиболее специфическим методом диагностики является культивирование C. trachomatis в культуре клеток in vitro. Для этого применяются различные типы клеток, которые имеют высокую чувствительность к этим возбудителям: Mc Coy, Hela-229 и другие. Для выделения C. trаchomatis используют различные средства, которые стимулируют размножение микроорганизмов в клетках.

При бессимптомном течении клетки Mc Coy специально обрабатывают циклогексимидом или стабильным поликатионом, что способствует более полному выявлению возбудителей. Вместе с тем, этот метод требует  соблюдения очень строгих методологических правил. Ограничивают широкое применение этого метода также его сложность, относительно большая стоимость, возможность получения результата через 72 часа от начала проведения, высокая угроза заражения персонала.

Кроме того, диагностическая ценность культурального метода снижается при исследовании патологического материала от больных с хроническими формами инфекции, которым проводили длительные курсы лечения. Снижению диагностической ценности этого метода способствует также высокая частота смешанного (микст-хламидийного) поражения.

Цитологический метод.

Цитологический метод позволяет выявить образованные хламидиями цитоплазматические включения при окраске препаратов по Романовскому-Гимза. Этот метод прост и доступен практически для каждой профильной лаборатории, однако чувствительность и специфичность его составляет всего 45%, что является недостаточным.

Иммунофлуоресцентный метод.

Иммунофлуоресцентный анализ — совокупность иммунохимических методик с применением иммунореагентов, в состав которых введены флуоресцентные метки флуоресцеин-изотиоцианатом (ФИТЦ). Различают два варианта иммунофлуоресценции — прямую и непрямую. В первом варианте иммунная антихламидийная сыворотка имеет флуоресцентную метку, во втором — без такой отметки, однако, добавляется сыворотка, меченая флуорохромом, и имеет антитела к антихламидийной сыворотке. Эти методики являются основными в диагностике хламидиоза. Они позволяют выявить до 85% случаев хламидийной инфекции.

Вместе с тем, при применении этого метода могут регистрироваться ложноотрицательные результаты, что обусловлено недостаточным количеством эпителиальных клеток в пробе, и ложноположительные при наличии у некоторых бактерий перекрестно реагирующих антигенов, которые могут реагировать с антителами к хламидиям.

Преимуществами метода является скорость проведения, достаточно высокая точность, непосредственное определение антигена возбудителя. К недостаткам иммунофлуоресцентного метода относятся: необходимость иметь люминесцентный микроскоп, субъективная интерпретация результатов, сложность одновременной обработки большого количества образцов.

Серодиагностика.

Определение хламидийных антител (серодиагностика) имеет вспомогательное значение, обусловленное слабой иммуногенностью возбудителя. Серологические показатели без параллельного бактериологического исследования могут быть диагностически достоверными только в двух случаях: 1) при обнаружении антител классов IgA или IgM, что отмечают примерно в 30-40% наблюдений, 2) при сероконверсии, когда наблюдается чёткое увеличение титра антител класса IgG в сыворотках в 2-4 раза от начального уровня, учитывая то, что однократное выявление антител к хламидиям может быть связано не только с существующей в настоящее время, но и с перенесённой ранее хламидийной инфекцией.

ИФА

Достаточно распространено в лабораторной практике определение антител к хламидиям с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Метод основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью активности ферментной метки, ковалентно связанной с антигеном. У больных с выраженными клиническими проявлениями чувствительность метода составляет 80-96%, при бессимптомном течении заболевания — 40-50%.

Возможность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов обусловлена теми же причинами, что и при проведении ИФА. Недостатками иммуноферментных тест-систем является то, что их специфичность и чувствительность зависят от их качества. К достоинствам метода относится возможность анализа крупной партии образцов при автоматизации процесса.

РНИФ

Реакция непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) основана на том, что на предметные стекла с предварительно нанесенными антигенами хламидий наносят исследуемую  сыворотку больных, а после инкубации — сыворотку, меченную флуорохромом. Комплекс антиген-антитело выявляется по специфическому свечению во время люминесцентной микроскопии. Преимуществом метода является то, что он позволяет осуществлять не только видоспецифическую, но и внутривидовую диагностику. Недостатки метода аналогичны таковым другим флуоресцентным методам.

РСК

С помощью реакции связывания комплемента (РСК) можно выявлять хламидийные антитела к родоспецифическому липополисахаридному (ЛПС) антигену. При урогенитальном хламидиозе результат считают положительным при определении сероконверсии или если титр антител превышает 1:64. Недостатками метода являются родоспецифичность и более низкая чувствительность по сравнению с другими серологическими методами, а также невозможность определения различных классов антител.

ПЦР

В последнее десятилетие проходят клиническую апробацию некоторые молекулярно-генетические методы диагностики хламидиоза, направленные на определение ДНК возбудителя в исследуемом материале. Наиболее широко внедрен в практику метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Основу метода составляют направленные олигонуклеотидами циклы синтеза ДНК, которые вызывают репликацию in vitro нуклеотидных последовательностей мишени.

Основными преимуществами метода ПЦР являются: высокая чувствительность и специфичность, неинвазивность и простота забора проб, простые требования к условиям транспортировки и хранения, возможность скрининга больших популяций, автоматизация процесса, скорость получения результатов. Метод применяют как при исследовании цервикальных и уретральных соскобов, так и осадка мочи.

Использование мочи в качестве исследуемого материала является неинвазивным методом диагностики, что значительно упрощает обследование. В настоящее время метод ПЦР является наиболее чувствительным методом диагностики урогенитальной хламидийной инфекции.